抗体标记好荧光后上机检测CV值很大如何优化
2022-06-09 10:05:41 点击：
前两天有位老师问崔工一个问题：
就是用PE标记好抗体后，CV值很大，不知道是什么原因。
崔工对这位老师所在的企业有一定的了解，前几年有接触过。
以前主要是用SAPE与抗体偶联。
从老师的问话中崔工直觉觉得是PE直接偶联抗体，说明这家企业在不断的研发新品。
用SAPE偶联抗体和用PE直接偶联抗体是不一样的，问清楚了崔工才能有针对性的给出参考建议。
崔工就问老师，你是用SAPE偶联抗体还是用PE直接偶联抗体。
老师的回答印证了崔工的直觉。
你们是怎么检测的，标记好的抗体是用微球上流式吗？你说下你的检测过程。
对的，我们是上流式检测，具体是样本加微球反应一定的时间，清洗，再把PE标记好的抗体加进去反应一定的时间，再清洗，上机检测。
你们检测步骤上没有问题，基本上都是这样操作的。但这个过程会影响CV值的地方会很多。
你可以从这几个方面去排除。
比如微球的均一性，抗体的均一性，PE染料的均一性，摸索微球与抗体的偶联比例，保证微球偶联上抗体后的均一性，摸索PE与抗体的偶联比例，保证PE偶联上抗体后的均一性。
老师说：我验证过了，是标记二抗的问题。
我标记1mg的时候CV值不高，但放大到10mg的时候CV值就不行了。
就这样的问题，标记PE过程中有什么细节需要注意的不？
小量的时候没问题，大量的时候会出现问题，这个结果很大的可能就是抗体上偶联的PE数量不均一导致的。
以前崔工也有客户遇到同样的问题。
你可以从缓冲液、反应温度、加入PE的方式这些方面去摸索。
以前有老师问崔工，你告诉我具体怎么调整吧，比如温度调到多少。
不是崔工不想告诉这位老师，是因为崔工不了解他的实验环境、抗体，崔工没法给出准确的调整方法。
我们每当帮客户开发荧光标记抗体时，为了能达到商品化标准，也是要不断摸索，花费相当长的时间，最后才摸索出了最佳条件。
不断的调整摸索，你肯定也能解决问题，相信你自己。
联系方式
订购热线： 13819966920 订购邮箱：sales@layabio.com
技术服务： 18966044497 技术支持：support@layabio.com
相关产品推荐：
- 上一篇：流式荧光染料藻红蛋白（沉淀）活化前的处理步骤是怎样的呢？ 2022/6/17
- 下一篇：抗体标记好荧光后能不能放-20°冷冻 2022/6/7