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藻红蛋白PE在荧光标记上作为一种荧光染料有哪些优点

2017-07-07 09:36:53      点击:

       藻红蛋白PE是一种从藻青菌(Cyanobacteria)和真核菌类中来的,十分稳定具有很强溶解性的荧光蛋白。该蛋白含有共价连接的四吡咯基团,它的生物学作用是聚集光,它利用荧光共振能源传递转化成一对特殊的叶绿素分子,再定位到光合反应中心。因为具有光收集功能,光吸收和发射荧光最大,而内部能量的传递或外界pH值或离子组成对荧光猝灭可以讲影响降低到最小,PE利用共价键结合的形式与抗体免疫球蛋白或其他蛋白质结合,形成稳定的复合。应用其复合物进行免疫荧光组织化学、流式细胞仪和FISH的检测,对抗原或DNA、RNA进行定量和定性分析,也是双重标记或多重标记首选的荧光蛋白。在荧光标记上作为一种荧光染料有以下优点:

1、与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联

2、Stokes移位相当大,具极高的发射量子产率;

3、有明确分子质量的齐性结构

4、具有非常高的水溶性;

5、荧光不被外部试剂猝灭,通过与蛋白质主链的共价结合, 荧光基团可被保护

6、具有强的长波长激发和发射荧光,可避免来自其他生物材料荧光的干扰

       PE有三种类型,分别为R—藻红蛋白(R-PE)、D—藻红蛋白(B-PE)和异位(或别)藻蓝蛋白(APC)。PE的光谱特点是各型藻红蛋白的光量子产率高达0.98,消光系数高达2.4X106cm-1·mol.L-1。以lmol为基准,在可比较的波长,荧光产率等于至少30个未猝灭的荧光黄分子或100个罗丹明分子的荧光产率。各型藻红蛋白均有商品化产品,例如二抗标记的B-PE、R-PE和APC,生物素化的B—PE、R-PE和APC,亲和素标记的B-PE、R-PE和APC产品。