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样本的脱盐方法有哪些?

2022-05-19 14:50:53      点击:

大家好,我是流式荧光崔工,一个旨在链接与流式荧光相关的朋友,一起赚钱、一起学习、一起工作、一起生活的靓仔。



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昨天的文章流式细胞仪液流系统正负压是个啥?回答了一位老师提的问题。

昨晚把文章推送出去,有位老师把崔工拉入了他组建的IVD仪器研发圈子群,并帮崔工把文章分享到了群里。

文章里提到的厂家,也帮崔工的文章分享到了一个专业大佬群里。

崔工就看着公众号后台文章阅读数和新增关注者数量持续上升。

崔工的个人微信也不断的有新的朋友添加,向崔工咨询荧光染料、标记耗材、设备等问题。

这样的状态持续到了今天下午下班时间,着实让崔工忙的不可开交了一把。

崔工没能及时回复大家的,并不是崔工耍大牌,是崔工没来得及,请老师们谅解,崔工只要看到了你的信息,不管多久都会给您一个答复。




 2 

新来的朋友可能还不了解崔工是干什么的?写这个账号的目的是什么?

崔工目前在就职于国内一家生产流式荧光染料的公司,公司主营产品有流式荧光染料、抗体标记配套耗材、抗体标记服务和少量的流式抗体。

崔工以前是做管理的,现在负责销售,兼职销售支持。

崔工写这个账号,是想把与流式荧光相关的朋友链接在一起,一起赚钱、一起学习、一起工作、一起生活。

同时把崔工所有的经历在以后的岁月中慢慢翻出来给大家看,让大家更加深入的了解崔工,信任崔工,有机会的时候可以跟崔工合作共赢。

崔工把这个号的成果跟大家聊聊。

崔工这个账号是很久就注册了,但因为工作比较忙,就没打理,最主要的是没想好能给读者们提供什么样的价值。

今年崔工的工作进行了调整,腾出了很多时间,崔工就想着可以把工作中各位老师提到的问题整理出来供大家参考。

这样不仅让崔工进行了复盘,也能帮助到大家,方便了自己也方便了别人,大家都开心的一个事情。

但没有想到的是,崔工这个账号反响非常不错。

让崔工在短短的1个月左右的时间里链接到了这个行业内的几百位老师,有公司老板、有做科研的、有做市场的、有做管理的、甚至还有在校学生。

崔工已跟大家形成了初步的信任,有给崔工介绍业务的,介绍工作的,有委托崔工帮忙寻找产品的,有委托崔工帮忙招聘的。

一句帮人就是帮自己深深的印在了崔工的头脑里。



 3 


最近几天不断的有老师问崔工如何去除小分子盐,可见这个问题是大家普片遇到的问题。


FITC标记抗体后,如何去除游离的抗体和FITC这篇文章中简单的介绍了FITC如何脱盐。


今天崔工就详细的分析下常用的脱盐都有哪些方法。


样本脱盐常用的有3种方法,超滤管脱盐、离心柱脱盐、透析袋脱盐。


超滤管由大小两个离心管套装组成,如下图。


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脱盐原理是在离心管内管中植入一张膜,利用膜表面孔径大小,在离心力的作用下,将样本中的大分子物质和小分子物质分开。



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溶液中的溶剂和小分子量物质、无机离子,从高压侧透过超滤膜进人低压侧,并作为滤液排出;而溶液中大分子物质、胶体微粒及微生物等被超滤膜截留。


超滤管的优点是,可以进行浓缩,上样的样本量可以比较大。


缺点是重复使用频次低,价格高,膜容易破。




离心脱盐柱

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离心式快速脱盐柱,根据填料颗粒粒径不同,将分子量大小不同的物质分离开来,可以在出色地完成蛋白质脱盐的同时保持极高的回收率,无需装柱。


脱盐柱的优点是,对盐和小分子的滞留率在95%以上,几乎等体积回收,样本不会被稀释,只需简单的几次离心,即可完成样品的脱盐或缓冲液置换实验。


缺点是,样本上样量不会太多,难适应对样本量比较大的脱盐。




透析袋

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透析袋通常是由半透膜制成的袋状容器,这个半透膜是有大小孔径的,在生物大分子的制备过程中,除去盐、少量有机溶剂、生物小分子杂质时都要用到透析的技术。


使用过程中将样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。


保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。


透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。


透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析。


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透析袋的优点是,样本装入透析袋后可以直接放4度冰箱过夜,不用管他;处理的样本量可以很大,平均价格比较低。


缺点是,透析时间比较长,你如果是急用样本的,不能选用这个方法;透析后会稀释样本。




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