样本的脱盐方法有哪些?
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最近几天不断的有老师问崔工如何去除小分子盐,可见这个问题是大家普片遇到的问题。
在这篇文章中简单的介绍了FITC如何脱盐。
今天崔工就详细的分析下常用的脱盐都有哪些方法。
样本脱盐常用的有3种方法,超滤管脱盐、离心柱脱盐、透析袋脱盐。
超滤管由大小两个离心管套装组成,如下图。
脱盐原理是在离心管内管中植入一张膜,利用膜表面孔径大小,在离心力的作用下,将样本中的大分子物质和小分子物质分开。
溶液中的溶剂和小分子量物质、无机离子,从高压侧透过超滤膜进人低压侧,并作为滤液排出;而溶液中大分子物质、胶体微粒及微生物等被超滤膜截留。
超滤管的优点是,可以进行浓缩,上样的样本量可以比较大。
缺点是重复使用频次低,价格高,膜容易破。
离心脱盐柱
离心式快速脱盐柱,根据填料颗粒粒径不同,将分子量大小不同的物质分离开来,可以在出色地完成蛋白质脱盐的同时保持极高的回收率,无需装柱。
脱盐柱的优点是,对盐和小分子的滞留率在95%以上,几乎等体积回收,样本不会被稀释,只需简单的几次离心,即可完成样品的脱盐或缓冲液置换实验。
缺点是,样本上样量不会太多,难适应对样本量比较大的脱盐。
透析袋
透析袋通常是由半透膜制成的袋状容器,这个半透膜是有大小孔径的,在生物大分子的制备过程中,除去盐、少量有机溶剂、生物小分子杂质时都要用到透析的技术。
使用过程中将样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。
保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。
透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析。
透析袋的优点是,样本装入透析袋后可以直接放4度冰箱过夜,不用管他;处理的样本量可以很大,平均价格比较低。
缺点是,透析时间比较长,你如果是急用样本的,不能选用这个方法;透析后会稀释样本。
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