荧光蛋白浓度怎么测？
2022-06-27 09:48:27 点击：
大家好，我是流式荧光崔工，一个旨在链接与流式荧光相关的朋友，一起赚钱、一起学习、一起工作、一起生活的靓仔。
— 1—
苏州的L老师对怎么准确检测荧光蛋白的浓度有些疑惑，就向崔工问到。
崔工把跟L老师的聊天记录贴出来，供大家参考。
— 2—
BCA法，说实在的，不怕大家笑，崔工以前不了解这个方法。
有人会说，崔工你了解那么多知识，这个都不知道。
这很正常，崔工以前是财务出身的，后转行到IVD这个行业的，IVD行业的知识也是一点一点积累的。
很感谢帮助过崔工的老师们，教会了崔工很多，给了崔工极大的信任。
不懂就是不懂，没必要端着装懂，崔工就是要把最真实的一面扒出来展现给大家，让大家很清楚的知道，崔工是一个可以信任的人，是一个可以合作共赢的家伙。
扯远了，回到BCA这个方法，崔工问了下度娘，度娘的回答是这样的：
BCA蛋白浓度检测是一个实验，是根据吸光值可以推算出蛋白浓度.碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，两分子BCA螯合一个Cu+。
将该水溶性复合物在562nm处的吸收值，与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。
实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
具体的测定方法如下
需要用到的实验试剂：
(1) BCA试剂的配制
① 试剂A，1L：分别称取10g BCA (1%)，20g Na2CO3·H2O(2%)，1.6g Na2C4H4O6·2H2O(0.16%)，4g NaOH (0.4%) ，9.5g NaHCO3(0.95%) ，加水至1L，用NaOH或固体NaHCO3调节pH值至11.25。
②试剂B，50ml：取2g CuSO4·5H2O (4%)，加蒸馏水至50ml。
③BCA试剂：取50份试剂A与1份试剂B混合均匀。此试剂可稳定一周。
(2)标准蛋白质溶液：称取0.5g牛血清白蛋白，溶于蒸馏水中并定容至100ml，制成5mg/ml的溶液。用时稀释十倍。
实验操作：
绘制标准曲线：
取96孔酶标板，按下表加入试剂。
上述试剂加完后，准确吸取20μl样品溶液于酶标孔中。
加入BCA试剂200μl，轻摇，于37℃保温30-60min。
冷却至室温后，以空白为对照，在酶标仪上562nm处比色，以牛血清白蛋白含量为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
以标准曲线空白为对照，根据样品的吸光值从标准曲线上查出样品的蛋白质含量。
— 3—
不知大家有没有遇到过相同或类似的问题。
如果您也遇到过相同或类似的问题，可以私信崔工，告诉崔工您的解决方法是怎样的。崔工会在后期的文章中写出您的解决方案来帮助其他人。
联系方式
订购热线： 13819966920 订购邮箱：sales@layabio.com
技术服务： 18966044497 技术支持：support@layabio.com
相关产品推荐：
- 上一篇：链霉亲和素SA是如何起到信号放大作用的 2022/8/17
- 下一篇：流式荧光染料藻红蛋白（沉淀）活化前的处理步骤是怎样的呢？ 2022/6/17